人工授精是養(yǎng)羊業(yè)中的重要實用生產(chǎn)技術(shù)，但是受胎率不高，限制了其在小型羊場及農(nóng)村的應(yīng)用。目前關(guān)于提高輸精效果的研究有很多[1-4]，影響羊人工授精效果的因素主要有衛(wèi)生狀況、精液處理、輸精技術(shù)等，本試驗通過幾組對比為實際生產(chǎn)篩選出一套有效的輸精技術(shù)，以推動肉羊生產(chǎn)及品種改良進(jìn)程。
1. 材料與方法
1.1試驗材料
1.1.1 試驗動物 所有試驗動物均是來自本單位下屬青島奧特種羊場的良種羊，包括無角道賽特、德克塞爾和小尾寒羊，母羊1.5周歲以上，公羊1.5～2周歲，標(biāo)準(zhǔn)飼管。
1.1.2 儀器與試劑
1.1.2.1儀器設(shè)備
顯微鏡；恒溫水浴鍋；羊用金屬輸精器（配注射器用）；玻璃輸精器；羊用細(xì)管輸精槍；羊用開膣器；手電筒；試管；解凍杯
1.1.2.2試劑藥品
葡萄糖；蔗糖；乳糖；檸檬酸；檸檬酸鈉；青霉素；鏈霉素；95％酒精；生理鹽水；新潔爾滅；高錳酸鉀；VB12
1.2 試驗方法
1.2.1 待配母羊的準(zhǔn)備 配種前兩個月根據(jù)母羊年齡、膘情、健康狀況、配種史進(jìn)行選擇，要求2～5歲、膘情適中、健康（尤其沒有生殖疾病）、無不良配種記錄。選擇后按試驗要求隨即分組，除正常標(biāo)準(zhǔn)飼管外每天加喂胡蘿卜1斤/只，強(qiáng)制運動2h。
1.2.2 公羊及精液的準(zhǔn)備 配種前2個月選擇2～5歲、身體健康、膘情適中、性欲旺盛的公羊加強(qiáng)飼管及運動，增加日糧中蛋白及維生素的水平，每天強(qiáng)制運動2h。配種前一個月開始采精并檢查精液質(zhì)量，堅持每周采精2～3次。配種前更具采精記錄選擇精子密度高、活力高、射精量大、精液質(zhì)量穩(wěn)定、性欲強(qiáng)的公羊留作配種用。凍精輸精時按常規(guī)方法解凍并檢查精子活力，0.3以下的不用。
1.2.3 抗生素的添加對鮮精輸精效果的影響
a.待配母羊的準(zhǔn)備 試驗羊挑選后分成2組，按1.2.1飼管。
b.發(fā)情母羊的識別 選擇健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群試情，結(jié)合對外陰及行為的觀察做好記錄。
c.輸精 發(fā)情后立即輸精，間隔8～10h再輸精1次，次日試情仍發(fā)情的繼續(xù)輸精。Ⅰ組采用子宮頸內(nèi)無抗生素鮮精輸精，Ⅱ組采用子宮頸內(nèi)添加抗生素鮮精輸精，輸入有效精子在5000～10000左右，整個輸精過程在前低后高的配種架上進(jìn)行，輸精結(jié)束后停留10～15min再驅(qū)趕母羊。輸精器械輸精前要嚴(yán)格消毒，輸精后要立即清洗，鮮精中含青鏈霉素各1000IU/ml。
d.妊娠判斷 配種后母羊堅持每天試情，輸精后連續(xù)兩個發(fā)情周期不發(fā)情視為妊娠，統(tǒng)計受胎率。
1.2.4 輸精位置及PGF2α對鮮精與凍精輸精效果的影響
a.待配母羊的準(zhǔn)備 選擇后隨即分成Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ六個組，按1.2.1飼管。
b.發(fā)情母羊的識別 選擇健康、性欲旺盛的青年公羊每天早上采用小群試情，結(jié)合對外陰的觀察做好記錄。
c.輸精 本試驗采用同只公羊多次輸精，發(fā)情后立即輸精，間隔8～10h再輸精1次，次日試情仍發(fā)情的繼續(xù)輸精。Ⅰ～Ⅳ組分別采用子宮頸鮮精、子宮頸凍精、子宮內(nèi)鮮精、子宮內(nèi)凍精輸精，輸入有效精子在5000～10000左右，精液中不添加PG; Ⅴ、Ⅵ組分別采用子宮頸鮮精、子宮頸凍精輸精，精液中添加2％（v/v）的PGF2α注射液。整個輸精過程在前低后高的配種架上進(jìn)行，輸精結(jié)束后停留10～15min再驅(qū)趕母羊。輸精器械輸精前要嚴(yán)格消毒，輸精后要立即清洗，凍精與鮮精中都加有1000IU/ml的雙抗。子宮內(nèi)輸精時左手用宮頸鉗固定子宮頸，右手持輸精槍試探著插入，進(jìn)入盲囊后稍后退，然后嘗試著從其他地方前進(jìn)，直到感覺阻力突然消失時即進(jìn)入子宮體，稍前行后輸精。
d.妊娠判斷 配種后母羊堅持每天試情，輸精后連續(xù)兩個發(fā)情周期不發(fā)情視為妊娠，統(tǒng)計受胎率。
2. 試驗結(jié)果
試驗中對添加抗生素對鮮精輸精效果的影響進(jìn)行了研究（見表1），用無抗生素的鮮精給106只母羊輸精，73只受胎，受胎率為68.9％；用添加1000IU/ml雙抗的鮮精輸精215只，185只受胎，受胎率86％。
表1 稀釋液中添加抗生素對鮮精輸精受胎率的影響
輸精母羊數(shù) 受胎母羊數(shù) 受胎率
Ⅰ組（無抗生素） 106 73 68.9%
Ⅱ組（1000IU/ml雙抗） 215 185 86%
試驗中比較了6個試驗組的輸精結(jié)果，輸精母羊數(shù)、受胎母羊數(shù)及受胎率分別為：Ⅰ組203、175、86.2％，Ⅱ組96、41、42.7％，Ⅲ組87、83、95.4％，Ⅳ組109、62、56.9％，Ⅴ組102、89、87.3％，Ⅵ組117、57、48.7％，見表2。
表2 輸精位置及PG添加對受胎率的影響
輸精母羊數(shù) 受胎母羊數(shù) 受胎率
Ⅰ組（宮頸鮮精無PG） 203 175 86.2%
Ⅱ組（宮頸凍精無PG） 96 41 42.7%
Ⅲ組（宮內(nèi)鮮精無PG） 87 83 95.4%
Ⅳ組（宮內(nèi)凍精無PG） 109 62 56.9%
Ⅴ組（宮頸鮮精含PG） 102 89 87.3%
Ⅵ組（宮頸凍精含PG） 117 57 48.7%
3. 討論
目前生產(chǎn)中使用較多的仍然是鮮精輸精，但是由于現(xiàn)場條件及技術(shù)人員水平的制約，對衛(wèi)生不太注意，精液中細(xì)菌含量很高，精液稀釋時多采用現(xiàn)成的稀釋液如：生理鹽水、維生素B12等（不含抗生素），輸精器械消毒處理也不嚴(yán)格，整個操作過程中會造成了精液的污染，降低受胎率的同時也造成了生殖道疾病的傳播。試驗表明精液內(nèi)細(xì)菌數(shù)與精子存活時間及活力保持有著明顯的負(fù)相關(guān)，因此在精液中添加一定量的抗生素非常必要，這不僅是提高受胎率的一項重要措施，也是減少疾病傳播的基本要求。本試驗中使用含雙抗1000IU/ml的精液輸精，與對照組有顯著差異，分析試驗結(jié)果認(rèn)為，添加抗生素一方面延長了精子在保存液中的存活時間，另一方面輸精后對雌性生殖道內(nèi)的細(xì)菌也有一定的殺滅作用，這與生產(chǎn)中對患輕度子宮內(nèi)膜炎的母牛先注入大量抗生素再輸精以提高受胎率的做法有相似的道理。羊的輕度子宮炎癥不容易被發(fā)現(xiàn)，加入抗生素輸精就顯得更為重要。
卵子從到達(dá)受精部位（具有受精能力）到喪失受精能力的時間為2小時，輸精過早，精子在卵子沒有到達(dá)受精部位之前已經(jīng)死亡或不具備受精的能力；輸精過遲，等精子到達(dá)受精部位時卵子已經(jīng)死亡或不具備受精的能力,但是排卵時間很難進(jìn)行準(zhǔn)確判斷，生產(chǎn)中采用多次輸精來提高受胎率。但是對于凍精來說，由于冷凍過程對精子造成了一定的損傷，使其在雌性生殖道內(nèi)的存活時間縮短，使其在恰當(dāng)?shù)臅r間到達(dá)受精位置非常重要，國內(nèi)外的有些試驗已經(jīng)證明在直接子宮內(nèi)輸精能顯著提高凍精受胎率，但是在生產(chǎn)中推廣宮內(nèi)輸精是很困難的，只有部分經(jīng)產(chǎn)母羊可以進(jìn)行宮內(nèi)輸精，生產(chǎn)中只有通過其他方法來解決這一難題，目前添加激素的研究較多，本試驗中通過幾個試驗組的比較發(fā)現(xiàn)PG確實能提高受胎率，但是對鮮精輸精效果影響不大。Kelly 1985年報道認(rèn)為PGE能顯著提高精子運動速度，精子頭部的轉(zhuǎn)動速率和精子的穿透能力[5]，還有研究認(rèn)為在解凍液里添加PG能提高精子解凍活力和頂體完整率。此外PGF2α還能促進(jìn)子宮平滑肌的收縮，有利于精子的在生殖道內(nèi)的運行；PGF2α有促排卵作用及促輸卵管收縮作用，對排卵、卵子運行、受精及胚胎著床有積極的正面意義。PGF2α是生產(chǎn)中常用的藥物，但是在羊的人工授精中使用不多，本試驗表明無論是鮮精還是凍精添加PGF2α都能提高凍精受胎率，尤其是在凍精使用過程中值得推廣，但是最佳的添加劑量值得進(jìn)一步研究。本試驗參照別人的方法對經(jīng)產(chǎn)母羊進(jìn)行過子宮頸輸精發(fā)現(xiàn)部分經(jīng)產(chǎn)母羊發(fā)情時可以過子宮頸或子宮頸內(nèi)深部輸精，而且結(jié)果顯示子凍精宮內(nèi)輸精受胎率顯著高于子宮頸輸精，對于經(jīng)產(chǎn)羊凍精輸精可以采用這一技術(shù)以提高受胎率。
本試驗中添加抗生素和PG輸精取得了較好的輸精效果，可以在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用；使用凍精輸精時添加PG可以提高受胎率，經(jīng)產(chǎn)母羊可以嘗試過子宮頸輸精或子宮頸深部輸精以提高受胎率。
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